三級甲等綜合醫(yī)院國營
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1、制備細(xì)胞懸液
對于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞,可直接進行下面的步驟2(計數(shù)與計算過程)。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細(xì)胞,首先需將培養(yǎng)物制備成細(xì)胞懸液。
1)終止培養(yǎng),將培養(yǎng)液吸出,用PBS洗培養(yǎng)物一次。
2)給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min。期間不斷在鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時,棄消化液。
3)加入一定量的培養(yǎng)液(如果這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液。
2、計數(shù)與計算過程
1)在細(xì)胞計數(shù)板中央放置計數(shù)專用的蓋玻片。
2)用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。
3)置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。
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