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端粒酶活性

基本信息

  • ??品诸悾?/b> 腫瘤科
  • 檢查分類: 免疫檢查
  • 適用性別: 男女均適用
  • 是否空腹:  非空腹
  • 手術(shù)參考價(jià): 32元
  • 科 室: 腫瘤科

端粒酶活性檢查簡介

端粒是真核生物染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu),由一富含鳥嘌呤的重復(fù)DNA序列及其相關(guān)蛋白組成。端粒是保護(hù)染色體末端穩(wěn)定必不可少的結(jié)構(gòu)。端粒長度的維持需要端粒酶活性的存在。永生細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞能夠長期生存,端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白體組成的復(fù)合體,屬一種專一的依賴RNA的逆轉(zhuǎn)錄酶,能以自身的RNA為模板,從頭合成染色體末端的端粒DNA,彌補(bǔ)細(xì)胞分裂時(shí)端粒DNA的丟失,維持端粒的長度,保持染色體的動(dòng)態(tài)平衡,使細(xì)胞獲得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR為基礎(chǔ)的檢測端粒酶的方法以來,端粒酶引起了人們的廣泛關(guān)注。人們發(fā)現(xiàn),端粒酶與細(xì)胞的增生、分化和不死性有著極為密切的關(guān)系,已成為目前腫瘤和衰老基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)之一。

端粒酶活性檢查過程

基因組DNA為0.1μg;緩沖液含50mmol/L氯化鉀,10mmol/LTris-HCl(pH8.4),1.5mmol/L氯化鎂,100μg明膠;每一引物為0.25μmol/L;dATP,dCTP,dGTP,dTIP各為200μmol/L;DNA聚合酶為2.5U,終體積為100μl。加數(shù)滴液體石蠟防止蒸發(fā)。
反應(yīng)周期:①變性:90℃30~60s;②引物和模板的退火溫度:40~60℃30~60s;③延伸:72℃1~2min。經(jīng)反復(fù)循環(huán)30~40次,最后1次72℃引物延伸7min后終止。除去液體石蠟后,產(chǎn)物可供分析。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,用溴乙錠染色,經(jīng)紫外燈照射可見預(yù)料擴(kuò)增長度的熒光條帶。產(chǎn)物也可與放射標(biāo)記或非放射標(biāo)記的寡聚核苷酸探針行Southern印跡雜交或點(diǎn)漬印跡雜交。如用PCR自動(dòng)儀則更為方便,將反應(yīng)試劑、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入試管后,放進(jìn)已調(diào)好程序,即所需變性→退火→延伸各自的溫度和時(shí)間及循環(huán)次數(shù)的自動(dòng)儀中進(jìn)行反應(yīng),即可獲得滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物。

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