三級甲等綜合醫(yī)院國營
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級甲等醫(yī)院,是國家衛(wèi)生健康委指定的全國疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國家 級
阿米巴原蟲抗原和抗體的測定原理:免疫熒光技術(shù)的原理是利用物質(zhì)吸收光能后,產(chǎn)生激發(fā)態(tài)而發(fā)光的特性。將具有這種特性的熒光素(異硫氰酸熒光黃或羅丹明B200)用化學(xué)方法結(jié)合在特異的抗體(抗原)的分子上,又不損害其抗體或抗原活性的一種熒光顯微鏡下的示蹤技術(shù)。抗體和抗原的結(jié)合是高度特異的,所以只要知道其中的一個(gè)因子,也就知道了另一個(gè)因子。免疫熒光技術(shù)就是利用上述兩種特性,把不可見的抗原抗體的反應(yīng)(一抗)與被熒光素標(biāo)記的抗體(抗抗體)反應(yīng),變?yōu)槿庋劭梢姷臒晒猓俑鶕?jù)組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)定位來判斷特異熒光所在。在熒光顯微鏡下我們所能見到的亮綠熒光,不是標(biāo)本本身(無色)發(fā)出的,而是熒光物質(zhì)受到激發(fā)后而發(fā)出的亮綠熒光。熒光標(biāo)記抗體技術(shù)稱熒光抗體技術(shù),熒光標(biāo)記抗原技術(shù)稱熒光抗原技術(shù)。
試劑:
(1)熒光標(biāo)記抗體(或抗原)。
(2)0.01mol/LpH7.2PBS緩沖液。
(3)組織或細(xì)胞基質(zhì)片。
(4)緩沖甘油(pH7.2)。
(5)熒光顯微鏡。
(6)濕盒。
操作方法:
(1)抗原(或抗體)基質(zhì)片(各種組織冰凍切片或培養(yǎng)細(xì)胞等)基質(zhì)片從冰箱取出立即風(fēng)干。使用前經(jīng)無水乙醇或丙酮、甲醇等固定劑處理(根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇固定劑)。一般固定3~15min,室溫晾干。
(2)被檢物(血清、腦脊液或其他滲出物等),根據(jù)需要用PBS適當(dāng)稀釋(1∶5或1∶10)滴于抗原基質(zhì)片上,置室溫或37℃溫箱反應(yīng)30min~1h。
(3)0.01mol/LpH7.2PBS沖洗15min(更換PBS3次)。
(4)加熒光標(biāo)記抗體,置室溫或37℃溫箱30min~1h。
(5)PBS沖洗同(3)。
(6)緩沖甘油(pH7.2)封片,熒光顯微鏡鏡檢。
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