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β-內酰胺酶的檢測
臨床標本中分離金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及最近發(fā)現(xiàn)的腸球菌屬少數(shù)菌株對青霉素、氨芐青霉素出現(xiàn)耐藥。由于上述菌株產(chǎn)生β-內酰胺酶水解前述抗生素。檢測該酶有下列方法:
(一)微生物活性消失法
此法是以一株對青霉素高度敏感的枯草芽胞桿菌的指示菌,如待檢菌株產(chǎn)生β內酰胺酶,破壞了青霉素,則在劃線兩邊有枯草芽胞菌生長,否則指示菌仍呈很大抑菌環(huán)。
(二)淀粉-碘測定法
β內酰胺酶破壞β內酰胺環(huán),碘與被打開β內酰胺環(huán)結合,使藍色的淀粉-碘復合物轉變成無色。
方法:用pH6.0磷酸緩沖液配制青霉素懸液6000μg/ml,取該液0.1ml置于微量稀釋板凹孔中,挑選檢測菌株數(shù)個菌落混懸于其中,搖動30min,靜置室溫中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即觀察顏色變化,陽性者當加入碘液后,首先立即出現(xiàn)藍色、如在10min內消失藍色,提示該菌產(chǎn)生β-內酰胺酶。
(三)酸測量法
青霉素被β-內酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚紅指示劑,由紅(紫)色(原液:枸櫞酸緩沖液pH8.5)→黃色(pH6.8以下)。
(四)頭孢硝基噻吩顯色反應
頭孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-內酰胺環(huán)被β-內酰胺酶打開,基質由黃色變成紅色。
液體方法:10mg頭孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亞砜中,然后用0.1mol/LPBS(pH7.0)再稀釋1:20,最后濃度為500μg/m1,溶液呈黃或淡橙色,保存4~10℃,可用幾個星期。取該溶液0.05ml置放于微量稀釋板凹孔中或小試管中,挑取被試菌落,制成濃厚懸液,與凹孔中基質液混和,室溫10~30min,頭孢硝基噻吩由黃變成紅色為陽性,若顯色不明顯,觀察可延長6h。
有報道紙片法用于流感嗜血桿菌和淋病奈瑟菌檢測β-內酰胺酶的結果是準確的,但對于某些菌株產(chǎn)生少量而與菌細胞緊密結合的β-內酰胺酶,如腐生葡萄球菌等,用液體法檢測更好。上述任何一種檢測方法都應用質量控制。
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