三級甲等綜合醫院國營
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一.吲哚試驗
方法:以接種環接種待試細菌的新鮮斜面培養物于鄧亨氏蛋白胨溶液中,37℃培養24~48小時后(可延長4~5天)。于培養液中加入戊醇或二甲苯2~3ml,搖勻,靜置片刻后,沿試管壁加入試劑2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液體變紅色者為陽性反應。
也可將一指頭大的脫脂棉,滴上兩滴歐立希氏試劑,再在同處加滴兩滴高硫酸鉀(K2S2O4)飽和水溶液,置于含培養液的被檢試管中,離液面約半寸,置燒杯內水浴煮沸為止,脫脂棉上出現紅色為陽性。此法略繁,但省試劑且準確,因為將試劑加到液體中,吲哚和糞臭素均呈陽性,而用此法,只是吲哚(它能揮發)呈陽性反應。
亦可以濾紙片浸濕1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%濃HCl溶液,然后以接種環刮取一環瓊脂的純培養物涂布于該濾紙上。
細菌涂印周圍呈藍色者為陽性,細菌涂印周圍無色澤變化或淡黃色者為陰性。
二.淀粉的水解
淀粉在酸的催化作用下,能發生水解;淀粉的水解過程:先生成分子量較小的糊精(淀粉不完全水解的產物),糊精繼續水解生成麥芽糖,最終水解產物是葡萄糖。
對劑:碘化鉀2g蒸餾水300ml
培養基:將細菌接種在平板上,置37度溫箱中培養24h,加革蘭氏碘液于菌落上,觀察顏色變化,呈藍色者為陰性,無藍色為陽性。
三.β-半乳糖苷酶試驗
試劑:0.75MONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸餾水中,在加入緩沖液(6.9gNaH2P04溶于45ml蒸餾水中,用30%NaOH調整pH為7.0,再加水至50ml)5ml,置4℃冰箱中保存。
方法:取純菌落用無菌生理鹽水制成濃的菌懸液,加入0.25mlONPG液,置35℃水浴20min至3h,觀察結果。
結果判定:通常在20~30min內顯色。出現黃色為陽性反應。
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